【利用绿色萤光蛋白示踪泛素在细胞内的动态分布和泛素对细胞增殖分化及凋亡影响研究】宋长城.pdf

【利用绿色萤光蛋白示踪泛素在细胞内的动态分布和泛素对细胞增殖分化及凋亡影响研究】宋长城.pdf

北京师范大学 Beijing Normal University 博士学位论文 Doctoral Disseration 论文题目:利用绿色荧光蛋白示踪泛素在细胞内的动态分布 和泛素对细胞增殖分化及凋亡影响的研究 TracingUbiquitinDynamicDistributioninLivingCellsby GFP-Ubiquitin Chime Protein and Study on Effect of Ubiquitin in Cell Proliferation,Differentiation and Apoptosis 研究生:宋长城 导师:王永潮教授 系别、年级:生命科学学院北京师范大学博士学位论文 摘要 为了探讨泛素蛋白水解酶通路(ubiquitinproteasomepathway,UPP)在细 胞增殖分化及润亡中的作用及其泛景(ubiquitin,Ub)在细胞中的动态分布,利用Ub-BSA偶联蛋白作为免疫抗原,制备了抗泛素的特异性单克隆抗体,可用于细胞内游离泛素及与靶蛋白结合泛素的检测。利用RT-PCR技术从 MEL细胞中获得全长的Ub基因,构建到真核表达载体pEGFP-C1上,获得 表达发光增强的绿色荧光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)和 Ub融合蛋白的重组质粒pEGFP-SU,将构建的质粒瞬时转染HeL北京师范大学博士学位论文 Abstract Inordertoinvestigate theroleofubiquitin-proteasome protein degradation pathway in cell proliferation,differentiation and apoptosis,and to study the ubiquitindistribution inlivingcells,aubiquitinchimeprotein(pEGFP-SU)is MELcells,andinserteditinframeintoeukaryoticexpressionvector