【新型抗菌□基因的设计合成与表达研究】郑青.pdf

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新型抗菌肽基因的设计、合成与表达研究(申请华南理工大学工学博士学位论文)广东省自然科学基金资助项目 培养单位:华南理工大学生物工程系 专业:发酵工程 研究生:郑青 指导教师:姚汝华教授 一九九七年五月华南理工大学博士学位论文 摘要 组表达载体pET-CAD和酵母重组表达载体pCL-CAD.用pET-CAD转化宿主菌大肠杆菌Bl21,IPTG诱导表达,表达产物为 N端含有11个氨基酸残基的T.Tag的融合多肽,SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS-PAGE)和酸性PAGE检测,可见一特异多肽区带,分子量大 约为5KD,与预期相符,表明CecropinAD基因在大肠杆菌中获得表 达.用锂盐(LiAc)法将pCL-CAD转化入酵母受体菌AB103中,在缺乏 亮氨酸的选择培养基上筛选转化子,经摇瓶发酵,提取发酵液产物,酸 性凝胶电泳检测有特异区带,以大肠杆菌K2D31为指示菌进行琼脂平 板华南理工大学博士学位论文 ABSTRACT the downstream of T7 promoter.and T.TagTM sequence of E.coli expression vectorpET-21d.TherecombinantexpressionvectorpET-CADwas constructed.TherecombinantplasmidpET-CADwastransformedinto E.colihostBlzi.TheCecropinADwasexpressedinfusion form when inducedbyIPTG.