【剑麻□催化反应及激活反应的动力学和机理研究】杨奇波.pdf
目 摘要 前言 实验(一)主要仪器和试剂(二)酶活力测定(三)动力学实验方法(四)酶的提取(五)酶纯度的鉴定 结果与讨论初速率的确定(二)反应条件选择 1、酶液放置时间 2、PH值 3、温度 4、不同温度下酶稳定性 5、底物浓度 6、酶浓度(三)酶催化反应动力学参数的湖定 1、反应活化能 2、反应米氏常数K和最大反应速率rmax(四)酶活性中心 1、植物蛋白酶动力学性质概述 2、HgCl2,碘乙酸对酶的抑制作用 3、L一半胱氨酸,EDTA对酶的激活作用(五)酶催化反应机理(六)L一半胱氨酸激活反应动力学及机理 1、激活反应动力学模型 2、激活反应机理
摘要 本文用硫酸铵从剑麻中提取剑麻蛋白酶,用裂解色谱法鉴定酶的纯度,分光光度法 测试剑麻蛋白酶催化重氮一5一氨基四唑酪蛋白(DHT一酪蛋白)水解反应。实验结 果表明,酶催化作用的最佳条件是PH值为7,温度为40℃,反应活化能Ea等于64 KJmo1-,米氏常数Km为0mgm1-。对酶催化反应机理进行了探讨,认为反应 是按Michaelis-.Menten机理进行反应的。研究了基试剂HgCl2、碘乙酸对酶反应 初速率的影响以及L一半胱氨酸、EDTA对酶的激活作用,证实了毓基对剑麻酶的活性 起重要作用,剑麻酶是疏基蛋白酶。
实验(一)主要仪器和试剂 721分光光度计(上海分析仪器三厂)Ty型精密PH计(厦门第二分析仪器厂)CS一501型超级恒温槽(重庆试验设备厂)81型磁力搅拌器 日本岛津GC-7A气相裂解色谱仪 CRR-1B色谱数据处理机 日立835-80型氨基酸自动分析仪电动离心机秒表 重氨一5一氨基四唑酪蛋白(生化试剂)L一半胱氨酸(生化试剂)东一号剑麻(华南农业大学提供)硫酸铵(分析纯)粗明胶(广州皮革厂提供)镍锌试剂(17](按文献配制)其它试剂均为分析纯试剂(二)活力的测定(17] 本文选择DHT-酪蛋白为底物测定剑麻酶活力。